紫外可見分光光度計的用途主要?dú)w納為以下幾點(diǎn)
一、是鑒定物質(zhì)。用來測量待測物質(zhì)對可見光的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器,稱為可見分光光度計;紫外可見分光光度計用來測量待測物質(zhì)對可見光或紫外光(200~760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器??梢詼y定核酸和蛋白的濃度,也可以測定細(xì)菌細(xì)胞密度。
二、待測物質(zhì)是標(biāo)準(zhǔn)物及標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照進(jìn)行分析。
三、是比較最大吸收波長吸收系數(shù)的一致性。
四、是物質(zhì)的純度檢驗(yàn)。
五、是推測化合物的分子結(jié)構(gòu)及構(gòu)成。
六、是判定絡(luò)合物的組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定。
紫外可見分光光度計分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸 收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量, 相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會相同,因此,每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或 測 定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。紫外可見分光光度法的定量分析基礎(chǔ)是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。朗伯定律是說明光的吸收與吸收層厚度成正比,比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響,即朗伯-比耳定律。